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        細胞劃痕實驗操作注意事項由普拉特澤生物技術為大家總結分享。普拉特澤生物——細胞實驗平臺承接細胞劃痕實驗多例，總結了大量細胞劃痕實驗操作的技巧與方法。

        細胞劃痕實驗是檢測細胞遷移運動中一種性價比較高的體外研究方法。其基本原理：當細胞長到融合成單層狀態時，在融合的單層細胞上人為制造一個空白區域，這個區域稱之為“劃痕”，劃痕邊緣的細胞會逐漸進入空白區域使“劃痕”愈合。這種過程類似體外傷口愈合過程，因此又稱之為傷口愈合實驗，可以用來觀察外源性因素對細胞遷移運動的影響，如藥物、響應刺激、基因等。

        細胞劃痕實驗的操作雖然過程簡單快速，但想得到比較理想的實驗結果也要注意很多實驗樣本和操作的細節，今天小編就來分享一些我們細胞平臺的技術操作時的各種注意事項，一起學習：

1、細胞的選取：通常永生化的細胞系和原代細胞常用作這方面的模型，如角質形成細胞和成纖維細胞。避免選取生長特別緩慢的、貼壁十分不牢固的或者堆積生長的細胞。

 2、細胞培養的密度；劃痕實驗一般是幾種細胞的結合，但是每種細胞的生長速度會不一樣，所以需要按照細胞的生長特性調整培養時間，細胞鋪滿孔底時劃痕的效果會比較好，建議是100%的鋪滿。

3、細胞培養方式：細胞培養方式一定要改成無血清或者低血清的培養基。細胞劃痕實驗意指細胞遷移而不是細胞增殖，因此需要將細胞增殖的影響降到最低。當然，一定程度上無血清培養可以忽略細胞增殖的影響，但由于細胞內信號傳遞的負面影響，細胞遷移的速度也會慢很多。培養環境要求37 ℃ 5% CO 2的培養箱，選取合適的時間點取樣拍照。

4、鋪細胞最好使用 6 孔板，因為 6 孔板可以保證有相當距離的平直劃痕，而且因為有5 條定位線，與劃痕相交，這樣就有 10 個可固定監測點，不作重復，誤差也很小。

5、如果連續監測 24 小時，你需要考慮到劃痕縮小是細胞遷移和細胞繁殖共同作用的結果，而不是單純的細胞遷移。如果你要單純的考慮細胞遷移，你可以先用絲裂霉素（1 μg/ml）處理一小時，抑制細胞的分裂，這樣你的結果就是細胞遷移的作用了。另外，使用無血清培養基也可以降低增殖對實驗結果的影響。

6、照片拍完之后，可以用 image J 來測量劃痕區域的像素定量比較細胞遷移的速度。

7、雖然無血清培養可以忽略細胞增殖的影響，但是由于細胞內信號傳導系統整體性的下調節，細胞遷移的速度也會慢很多。

8、用槍頭畫線時盡量垂直，以6孔板為例 ，一個孔可以畫6條線

9、畫線之后一定要用PBS洗兩次，以去除劃下的細胞

10、注意培養方式一定要改成無血清或者低血清的培養基，因為：劃痕后用無血清培養基培養細胞，意在說明在監測的 24 小時內，劃痕的縮小是細胞 遷移作用的結果，所以要將細胞增殖造成細胞遷移的影響降到蕞低；但若細胞改成無血清培養后大面積漂浮，需要適量加入血清濃度不能高于2%。

11、（5）放入37℃ 5% CO2培養箱，培養。可按0，10，12，15時間點取樣，拍照(具體時間依實驗需要而定)。

12、（6）統計方法：使用Image J軟件打開圖片后，抓取自己畫的線條，計算細胞間距離的平均值。

        細胞劃痕實驗作為研究細胞遷移能力的基礎實驗，每一步都非常的重要，怎樣可以經濟實惠的把實驗做完而得到一份高質量的結果，小編就把技巧和注意事項分享給大家了，希望可以幫到您，您有細胞劃痕和各類細胞實驗外包與代做的需求，請一定要認準普拉特澤生物！我們下期見！