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2025-08-30 19:19:57
實驗介紹
【應用簡介】
遷移是腫瘤細胞轉移過程中必不可少的環節之一。腫瘤細胞與母體瘤分離，穿越血管壁，侵襲周邊正常組織時，需要一定的運動能力。高轉移的腫瘤細胞通常具奮較強的運動性。多種物質可剌激腫瘤細胞的遷移，如腫瘤細胞分泌因子、生長因子、細胞外基質成分(FN、LN)以及一些癌轉移靶器官的代謝產物或分泌產物等生長因子對腫瘤細胞有趨化作用，可使其發生定向運動。測定方法以細胞劃痕法和Transwell小室法。
【技術原理】
細胞劃痕法是簡捷測定細胞遷移運動與修復能力的方法，類似體外傷口愈合模型，在體外培養皿或平板培養的單層貼壁細胞上，用微量槍頭或其他硬物在細胞生長的中央區域劃線，去除中央部分的細胞，然后繼續培養細胞至實驗設定的時間，取出細胞培養板，觀察周邊細胞是否生長至中央劃痕區，以此判斷細胞的生長遷移能力，實驗通常需設定正常對照組和實驗組，實驗組是加了某種處理因素或藥物、外源性基因等的組別，通過不同分組之間的細胞對于劃痕區的修復能力，可以判斷各組細胞的遷移與修復能力。
【實驗方法】
Step1：細胞培養
Step2：細胞接種于6孔板中
Step3：細胞轉染或藥物處理
Step4：劃痕
Step5：鏡檢
案例展示
2株肺癌細胞的Transwell侵襲能力檢測
技術總結
1、細胞劃痕實驗選擇6孔板進行。
2、使用培養板前，應事先在孔板背部用馬克筆畫上數條穿過孔板的平行橫線，便于之后的拍照定位。
3、細胞接種如6孔板時，密度應選擇能使其在第二天融合度達到90%以上為宜。
4、對細胞層進行劃痕時，用槍頭比著直尺，盡量垂直于背后的橫線劃痕，槍頭要垂直，不能傾斜(不同孔之間最好使用同一只槍頭)。
5、劃痕后，PBS洗細胞3次，去除劃下的細胞，使劃痕區域干凈，再加入無血清培養基。
6、按時間點4倍鏡下進行拍照，保證劃痕居中且垂直，注意背景一致。
送檢與交付標準
| 樣品類型 | 樣品需求 | 保存條件 | 運輸條件 | 備注 |
|---|---|---|---|---|
| 凍存細胞 | 1.取對數生長期的細胞，消化離心收集細胞，加入凍存液吹打混勻，裝入凍存管，標明細胞名稱/細胞代數，凍存細胞數量在1-5*106個/ml。 2.項目啟動后細胞復蘇，復蘇后3天反饋細胞狀態，3-5天反饋細胞污染情況，5-7天反饋支原體污染情況。 3. 細胞詳細信息（名稱、培養基和其他培養條件等，如經過特別處理需告知并提供必要的信息） | 液氮 | 干冰 | 所有樣本均須有唯一標記，且標記清晰可識 |
| 復蘇后細胞 | 1.使用T25培養瓶運輸。細胞匯合度達到60%以上，裝滿培養液，只留紐扣大小的氣泡，瓶口用封口膜封好，標明細胞名稱/細胞代數/接種時間/培養基類型，瓶子固定運輸。 2.收到細胞后3天反饋細胞狀態，3-5天反饋細胞污染情況，5-7天反饋支原體污染情況。 3. 細胞詳細信息（名稱、培養基和其他培養條件等，如經過特別處理需告知并提供必要的信息） | 常溫 | 常溫 | |
| 質粒 | 1.純度高，無內毒素，無蛋白質，基因組DNA/RNA污染，質粒A260:A280的比值在1.8-2.0之間 2.濃度不低于0.5μg/μl，總量大于100μg，無內毒素處理 3. 載體詳細信息，包括名稱、大小、抗性、熒光標記 | -20℃ | 冰袋 | |
| 病毒 | 1.慢病毒：滴度不低于1*108TU/ml，體積約200μl，標明制備時間，且沒有反復凍融 2.腺病毒：滴度不低于1*109PFU/ml，體積約200μl，標明制備時間，且沒有反復凍融 3.明確是否表達熒光標簽蛋白及其種類，最好需要提供病毒載體圖譜； | -80℃ | 干冰 |
電話：400-691-6686
在線時間：8:00-24:00
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