原位雜交實驗操作常見問題答疑
2022-05-30 14:56:34
來源/作者：普拉特澤-病理染色技術平臺
《原位雜交實驗操作常見問題答疑》由普拉特澤生物為大家總結分享，本文從原位雜交操作的溫度、樣本、探針、實驗技術優勢等方面來詳細分析解答。普拉特澤生物病理實驗平臺專業承接原位雜交等組織細胞的染色觀察、檢測服務，以專業的科研素養和豐富的實驗經驗為廣大科研人員提供實驗服務。
上期我們講過了原位雜交實驗的介紹、步驟、注意事項，大家還記得嗎？不記得可以回去復習，鏈接奉上：
那現在，我們就來一個一個解答大家關于原位雜交的問題吧！
Qusetion1：怎樣保證FISH熒光原位雜交操作時的溫度呢？
答：有條件的情況下可以用熒光原位雜交的專用儀器進行操作。人工操作的話要注意：
(1)對熒光原位雜交操作過程中可能使用的一些儀器(如水浴鍋，孵箱進行溫控檢查，不符合要求的進行更換)。
(2)盡可能地保持環境溫度在20度以上。
(3)針對需要預熱以達到要求溫度的試劑，在使用前必須使用溫度計對其進行測溫。
(4)同時檢測的樣本最好不超過4塊，操作中一定要迅速，實驗人員要注意一些小部件(諸如載玻片和蓋玻片)的溫度，尤其是在冬季。
Qusetion2：同一樣本可以多次進行熒光原位雜交嗎？
答：一般情況下，如果操作沒有得到理想的結果，是可以將探針洗滌然后進行再次的雜交的。如果使用的是直標型探針，還可以使用不同探針對同一樣本進行反復雜交。針對不同的樣本，處理方法略有不同。
Qusetion3：在實際熒光原位雜交操作中，那些因素比較重要?
答：實驗中最重要的因素是溫度、光照、濕度和各種試劑的PH值。溫度和濕度直接影響著探針和目標DNA/RNA的雜交效率;光照影響著熒光染料的強度，所以探針要避光保存，其已經雜交的片子可用防熒光淬火劑封片目避光保存；各種試劑pH也要精確達到要求，這也直接關系到FISH的穩定性。
Qusetion4：直標型探針和間標型探針有什么區別？
答：為什么我們要選擇直標型探針?所謂的直標型探針是指探針共價連接熒光表基團，間標型探針則是指DNA探針先與某個半抗原連接，諸如生物素或地高辛，然后半抗原與熒光素基團連接從而形成探針-半抗原-熒光素基團，類似“三明治”的復合物，與間標型探針相比，直標型探針具有低背景，高特異性的特點。隨著熒光染料和熒光檢測技術的不斷發展，直標型探針的靈敏度也不斷提高。因而在熒光原位雜交(FISH)檢測領域，尤其是在疾病分型領域，探針大多采用直標型設計。
Qusetion5：FISH熒光原位雜交技術有什么主要優勢呢?
答：（1）安全、快速、靈敏度高。
（2）探針穩定，能較長時間保存。
（3）多色標記，簡單直觀。
（4）可用于中期染色體及間期細胞的分析。
（5）可應用于新鮮、冷凍或石蠟包埋標本以及穿刺物和脫落細胞等多種物質的檢測。
好啦，那關于原位雜交大家常問的問題就回答到這里啦，還有更多的需求可以給客服留言，技術會耐心解答，歡迎學術交流！有fish和原位雜交代做需求也可以隨時聯系我們哦，我們下個實驗見！
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