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        Question：做COIP沒有想要的目的條帶怎么辦？（普拉特澤生物提供長期穩定的COIP代做外包服務）

        答：COIP實驗沒有目的條帶的原因很多，不同原因導致的沒有目的條帶處理方法不一樣，我們來一個一個看：

        1、有可能是樣品被蛋白酶降解，對應的策略是需要添加蛋白酶抑制劑，且所有操作保持4℃以下冰上操作并防止凍融。

        2、有可能是抗體濃度太低導致條帶較淺，則需要調整IP或IB抗體濃度，必要時設立濃度梯度，摸索最佳濃度。

        3、抗體親合力太低，選用適合于IP或IB的相應抗體；

        4、有可能IP抗體未與瓊脂糖/磁珠結合。此種情況則需要選選用適合于IP的相應珠子，正確保存防止變質或干燥。

        5、若Tag未暴露在融合蛋白構象的表面，則需要改變tag融合表達部位。

        6、裂解液鹽堿度太高，則需要改用低鹽堿度裂解液。

        7、目的蛋白在樣本中表達量低或者不表達，則需首先對目的蛋白表達量進行檢測，或者加大IP中加入的蛋白裂解物并進行預處理。

        8、目的蛋白未被洗脫可能導致沒有條帶，須保證使用合適的洗脫液，保證洗脫液的強度和pH值合適。

        9、抗體選擇不當或者不工作，則須利用WB對抗體進行驗證。

        分子互做技術咨詢：18570028002

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