成球?qū)嶒?yàn)
成球能力是腫瘤干細(xì)胞體外鑒定的一個(gè)重要方法，其判斷的是單個(gè)細(xì)胞在合適的條件培養(yǎng)基自我更新的能力。
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實(shí)驗(yàn)介紹
【應(yīng)用簡(jiǎn)介】
成球能力是腫瘤干細(xì)胞體外鑒定的一個(gè)重要方法，其判斷的是單個(gè)細(xì)胞在合適的條件培養(yǎng)基自我更新的能力，一般用細(xì)胞球形成效率表示。對(duì)于某些腫瘤如膠質(zhì)瘤和乳腺癌，它們的腫瘤干細(xì)胞在體外條件培養(yǎng)時(shí)相對(duì)較容易形成細(xì)胞球，而另一些上皮腫瘤如肝癌、結(jié)腸癌等則相對(duì)成球困難些。
【技術(shù)原理】
腫瘤干細(xì)胞能分化出不同表型，具有不斷自我更新和分化能力，在添加了生長(zhǎng)因子的無(wú)血清培養(yǎng)基中能培養(yǎng)形成細(xì)胞球。
【實(shí)驗(yàn)方法】
Step1：細(xì)胞培養(yǎng)；
Step2：細(xì)胞轉(zhuǎn)染或藥物處理；
Step3：將細(xì)胞接種于超低粘附培養(yǎng)板中，以成球培養(yǎng)基培養(yǎng)；
Step4：圖片采集。
案例展示
處理組細(xì)胞成球較對(duì)照組小，說(shuō)明該處理因素能抑制細(xì)胞成球。
技術(shù)總結(jié)
在細(xì)胞成球?qū)嶒?yàn)過(guò)程中需配制成球?qū)Ｓ门囵B(yǎng)基，所用細(xì)胞培養(yǎng)板為超低黏附培養(yǎng)板。細(xì)胞接種密度需要自己摸索。低密度常用于原代腫瘤干細(xì)胞的提取，篩選可以非粘附生長(zhǎng)的細(xì)胞。高密度用于細(xì)胞球的擴(kuò)增，一般來(lái)說(shuō)5000/ml以上。培養(yǎng)過(guò)程中無(wú)需換液，隔2-3天補(bǔ)液即可。
送檢與交付標(biāo)準(zhǔn)
| 樣品類(lèi)型 | 樣品需求 | 保存條件 | 運(yùn)輸條件 | 備注 |
|---|---|---|---|---|
| 凍存細(xì)胞 | 1.取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，消化離心收集細(xì)胞，加入凍存液吹打混勻，裝入凍存管，標(biāo)明細(xì)胞名稱/細(xì)胞代數(shù)，凍存細(xì)胞數(shù)量在1-5*106個(gè)/ml。 2.項(xiàng)目啟動(dòng)后細(xì)胞復(fù)蘇，復(fù)蘇后3天反饋細(xì)胞狀態(tài)，3-5天反饋細(xì)胞污染情況，5-7天反饋支原體污染情況。 3. 細(xì)胞詳細(xì)信息（名稱、培養(yǎng)基和其他培養(yǎng)條件等，如經(jīng)過(guò)特別處理需告知并提供必要的信息） | 液氮 | 干冰 | 所有樣本均須有唯一標(biāo)記，且標(biāo)記清晰可識(shí) |
| 復(fù)蘇后細(xì)胞 | 1.使用T25培養(yǎng)瓶運(yùn)輸。細(xì)胞匯合度達(dá)到60%以上，裝滿培養(yǎng)液，只留紐扣大小的氣泡，瓶口用封口膜封好，標(biāo)明細(xì)胞名稱/細(xì)胞代數(shù)/接種時(shí)間/培養(yǎng)基類(lèi)型，瓶子固定運(yùn)輸。 2.收到細(xì)胞后3天反饋細(xì)胞狀態(tài)，3-5天反饋細(xì)胞污染情況，5-7天反饋支原體污染情況。 3. 細(xì)胞詳細(xì)信息（名稱、培養(yǎng)基和其他培養(yǎng)條件等，如經(jīng)過(guò)特別處理需告知并提供必要的信息） | 常溫 | 常溫 | |
| 質(zhì)粒 | 1.純度高，無(wú)內(nèi)毒素，無(wú)蛋白質(zhì)，基因組DNA/RNA污染，質(zhì)粒A260:A280的比值在1.8-2.0之間 2.濃度不低于0.5μg/μl，總量大于100μg，無(wú)內(nèi)毒素處理 3. 載體詳細(xì)信息，包括名稱、大小、抗性、熒光標(biāo)記 | -20℃ | 冰袋 | |
| 病毒 | 1.慢病毒：滴度不低于1*108TU/ml，體積約200μl，標(biāo)明制備時(shí)間，且沒(méi)有反復(fù)凍融 2.腺病毒：滴度不低于1*109PFU/ml，體積約200μl，標(biāo)明制備時(shí)間，且沒(méi)有反復(fù)凍融 3.明確是否表達(dá)熒光標(biāo)簽蛋白及其種類(lèi)，最好需要提供病毒載體圖譜； | -80℃ | 干冰 |
電話：400-691-6686
在線時(shí)間：8:00-24:00
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