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實驗介紹
【技術原理】
流式利用不同熒光物質標記的單克隆抗體,與待測成分作用,然后上流式細胞儀檢測待測細胞。待測細胞隨流動室內的流動鞘液排列成單列,一個個迅速通過激光聚焦區,激光在對每個細胞進行照射時可同時得到前向角散射和側向角散射2種散射光以及激發熒光標記物發出的信號,利用這些信號,可計算出相對含量,從而得到細胞群的相對比值。
粒細胞可由其在瑞氏染色下的表現分為中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞三類,絕大部分的粒細胞是中性粒細胞。 中性粒細胞的7個階段標記物:粒單系祖細胞、原始粒細胞、早幼粒細胞、中幼粒細胞、晚幼粒細胞、桿狀核、分葉核。
我們常用的檢測指標
中性粒細胞(人):CD15、CD16、CD49d(-)
噬堿性粒細胞(人):CD123、CD203c、CD117(-)
噬酸性粒細胞(人):CD11b、CD193、EMR1
中性粒細胞(鼠):CD11b、 Ly6G、CD115(-)
噬堿性粒細胞(鼠):CD200R3、 FcεRIα
噬酸性粒細胞(鼠):CD11b、 CD193、 F4 / 80
【實驗流程】
Step1:制成單細胞懸液(組織樣本)
Step2:溶血(細胞樣本無需進行此步驟)
Step3:離心去上清
Step4:調整細胞密度
Step5:加入相應的標記抗體
Step6:孵育
Step7:洗滌后離心去上清
Step8:上機檢測
注意事項
1、為保證所得結果的可靠性,每次實驗前應用標準熒光微球檢測儀器的變異系數;
2、每次應做陰性對照、陽性對照、質控對照、以確保將各種試劑及操作過程對結果的影響降至最低;
3、外周血單個核細胞(PBMC)是一些科研實驗中經常用的材料,是利用Ficoll從全血中提取得到,主要為淋巴細胞和單核細胞;需要檢測粒細胞等多形核細胞,就需要避免用PBMC需提供全血。
送檢與交付標準
樣品類型 | 樣品需求 | 運輸條件 |
---|---|---|
組織 | 離體后組織制成單細胞懸液,加入PBS培養基內 | 常溫運輸 |
活細胞 | 樣本量:1*106個細胞/TEST,加入PBS培養基內 | 常溫運輸 |
血液 | 將血液采集在EDTA肝素鈉的抗凝采血管內 | 常溫運輸 |