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粒細胞檢測

粒細胞可由其在瑞氏染色下的表現分為中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞三類,絕大部分的粒細胞是中性粒細胞。 中性粒細胞的7個階段標記物:粒單系祖細胞、原始粒細胞、早幼粒細胞、中幼粒細胞、晚幼粒細胞、桿狀核、分葉核。

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實驗介紹

【技術原理】

       流式利用不同熒光物質標記的單克隆抗體,與待測成分作用,然后上流式細胞儀檢測待測細胞。待測細胞隨流動室內的流動鞘液排列成單列,一個個迅速通過激光聚焦區,激光在對每個細胞進行照射時可同時得到前向角散射和側向角散射2種散射光以及激發熒光標記物發出的信號,利用這些信號,可計算出相對含量,從而得到細胞群的相對比值。

粒細胞可由其在瑞氏染色下的表現分為中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞三類,絕大部分的粒細胞是中性粒細胞。 中性粒細胞的7個階段標記物:粒單系祖細胞、原始粒細胞、早幼粒細胞、中幼粒細胞、晚幼粒細胞、桿狀核、分葉核。

我們常用的檢測指標

中性粒細胞(人):CD15、CD16、CD49d(-)

噬堿性粒細胞(人):CD123、CD203c、CD117(-)

噬酸性粒細胞(人):CD11b、CD193、EMR1

中性粒細胞(鼠):CD11b、 Ly6G、CD115(-)

噬堿性粒細胞(鼠):CD200R3、  FcεRIα

噬酸性粒細胞(鼠):CD11b、  CD193、  F4 / 80


【實驗流程】

Step1:制成單細胞懸液(組織樣本)

Step2:溶血(細胞樣本無需進行此步驟)

Step3:離心去上清

Step4:調整細胞密度

Step5:加入相應的標記抗體

Step6:孵育

Step7:洗滌后離心去上清

Step8:上機檢測

注意事項

1、為保證所得結果的可靠性,每次實驗前應用標準熒光微球檢測儀器的變異系數;

2、每次應做陰性對照、陽性對照、質控對照、以確保將各種試劑及操作過程對結果的影響降至最低;

3、外周血單個核細胞(PBMC)是一些科研實驗中經常用的材料,是利用Ficoll從全血中提取得到,主要為淋巴細胞和單核細胞;需要檢測粒細胞等多形核細胞,就需要避免用PBMC需提供全血。

送檢與交付標準

樣品類型樣品需求運輸條件
組織離體后組織制成單細胞懸液,加入PBS培養基內常溫運輸
活細胞樣本量:1*106個細胞/TEST,加入PBS培養基內常溫運輸
血液將血液采集在EDTA肝素鈉的抗凝采血管內常溫運輸



流式交付標準.jpg