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實驗介紹
【技術(shù)原理】
流式利用不同熒光物質(zhì)標記的單克隆抗體，與待測成分作用，然后上流式細胞儀檢測待測細胞。待測細胞隨流動室內(nèi)的流動鞘液排列成單列，一個個迅速通過激光聚焦區(qū)，激光在對每個細胞進行照射時可同時得到前向角散射和側(cè)向角散射2種散射光以及激發(fā)熒光標記物發(fā)出的信號，利用這些信號，可計算出相對含量，從而得到細胞群的相對比值。
調(diào)節(jié)性T細胞（Tregs）是免疫系統(tǒng)中的必需細胞，可抑制其他細胞的免疫反應，旨在限制過度反應并防止自身免疫。Tregs以CD4，CD25和Foxp3的表達為特征，而缺少CD127。CD4 + Foxp3 +調(diào)節(jié)性T細胞已被稱為“天然存在”的調(diào)節(jié)性T細胞，以將其與體外產(chǎn)生的“抑制性” T細胞群體區(qū)分開。
輔助性T細胞(Follicular helper T cells,Tfh細胞)為生發(fā)中心產(chǎn)生親和力成熟的B細胞提供了必不可少的幫助。通過許多標準，它們可與其他T輔助細胞類型區(qū)分開，包括轉(zhuǎn)錄因子BCL-6和CXCR5的表達，CXCL13的受體將Tfh細胞募集到卵泡。它們的功能也是獨特的，因為它們通過產(chǎn)生IL-21（一種輔助細胞因子，可有效刺激B細胞分化為抗體形成細胞）來提供與Th2細胞不同的B細胞幫助。
濾泡調(diào)節(jié)性T細胞(Follicular regulatory T cells,Tfr細胞)在分化早期，細胞因子受體及其它共刺激/共抑制信號協(xié)同啟動了Treg細胞向Tfr細胞的分化信號，此信號的集合最終誘導Treg表達轉(zhuǎn)錄因子Bcl-6及趨化因子受體CXCR5，分化為早期Tfr細胞。
白細胞介素35 (interleukin-35,IL-35)為IL-12家族的新成員，是由p35和Ebi3以共價鍵相結(jié)合形成的異源二聚體，主要通過抑制Thl7細胞分化和促進調(diào)節(jié)性T(Treg)細胞增殖在多種疾病的免疫調(diào)控中發(fā)揮免疫抑制作用。iTr35細胞為IL-35誘導產(chǎn)生的一種新型誘導性Treg細胞亞群，具有長期的功能穩(wěn)定性.因此,iTr35細胞和IL-35在免疫調(diào)控中具有重要作用。
我們常用的檢測指標：CD4、CD25、FoxP3、CXCR5、IL-35。
【實驗流程】
組織：制成單細胞懸液-溶血-離心去上清-調(diào)整細胞密度-加入相應的標記抗體-孵育-離心去上清-上機
血液：溶血-離心去上清-調(diào)整細胞密度-加入相應的表面標記抗體-孵育-離心去上清-上機
案例展示
注意事項
血液樣本量需提供5-10ml。
送檢與交付標準
| 樣品類型 | 樣品需求 | 運輸條件 |
|---|---|---|
| 組織 | 離體后組織制成單細胞懸液，加入PBS培養(yǎng)基內(nèi) | 常溫運輸 |
| 活細胞 | 樣本量：1*106個細胞/TEST，加入PBS培養(yǎng)基內(nèi) | 常溫運輸 |
| 血液 | 將血液采集在EDTA肝素鈉的抗凝采血管內(nèi) | 常溫運輸 |
電話：400-691-6686
在線時間：8:00-24:00
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