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GUS染色

GUS染色的實驗目的是對植物樣本進行染色,因為絕大多數植物細胞內不存在內源GUS活性,因此GUS基因廣泛用作轉基因植物的報告基因。

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【實驗原理】

        GUSβ-glucuronidaseβ-D-葡萄糖苷酸酶)基因是目前常用的一種報告基因,其表達產物β-葡萄糖苷酸酶是一種水解酶,能催化許多β-葡萄糖苷酯類物質的水解,它可以將5--4--3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯(5-bromo-4-chloro-3-indolyl-glucronide,縮寫為X-Gluc)分解為藍色物質。

【實驗方法】

  (1)組織化學染色定位方法

  (2)熒光法測定GUS活性

  (3)分光光度法測定GUS活性

【實驗方法

  以某植物樣本為例:

        step1: 90%丙酮固定20min;

        (丙酮(acetoue)涉透力很強,能使蛋白質沉流凝固,但不影響蛋白質的功能基團而保存鼻的活性,用于固定磷酸酶和氧化酶效果較好,因此可用于GUS染色前的固定,可防止GuS信號的擴散。鐵點是固定快。滲透力強,易使組織細胞收縮。保持細胞結構欠佳。一般4C20分鐘為直)

        Step2 : 1 mL GUS洗液洗去丙酮,洗2:

        Step3 : GUS染色液,冰上抽真空15-20 min;

        Step4 : 37C放置,隔一陣觀察- -下,染上色了就進行下面步驟:

        Step5 : 吸出染色液,加入1mL 70%乙醇,停止染色反應及脫色:

        Step6 : 更換幾次乙醇直到脫色完全;

        Step7 : 解剖鏡及顯微鏡拍照觀察

  載玻片上加適量HCG透明液,用鑷子取出幼苗在透明液中鋪平,蓋上蓋玻片,解剖鏡觀察整株,顯微鏡觀察細節并拍照。

【交付標準】


1. 實驗報告 

2. 真實實驗結果

3. 原始圖片

4. 實驗原始數據

5. 剩余物料在周期內可返還(超過周期,不予返還)

【送檢流程】