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細胞增殖檢測

流式細胞術是檢測細胞增殖的一種重要手段,其優點在于能夠實現多熒光指標同時檢測,并且可以對混合樣本中的特定細胞進行增殖分析,常用CFSE和BrdU法。

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實驗介紹

【技術原理】

1、CFSE(CFDA-SE) 是一種可對活細胞進行熒光標記的新型染料,可以標記活體細胞。CFDA-SE是一種帶有琥珀酰亞胺(NHS)的熒光染料,可以結合細胞內的蛋白質。CFDASE在結構上將酚羥基部位改造成AM體,所以自身不發熒光,熒光背景低,脂溶性高,能夠輕易穿透細胞膜,進入細胞內的CFDA-SE的AM 部位能被細胞內酯酶水解生成CFSE,通過共價結合賴氨酸側鏈的氨基而摻入細胞內和細胞表面的蛋白,且結合后發出強的綠色熒光。細胞分裂增殖過程中,它的熒光強度會隨著細胞的分裂而逐級遞減,標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中,因此其熒光強度是親代細胞的一半。CFSE的琥珀酰亞胺(NHS)和細胞內蛋白質的氨基部位結合,固定在細胞內,不會漏出細胞外。CFSE進入細胞后定位于細胞膜、細胞質和細胞核,在細胞核的熒光最強。

2、BrdU是一種胸腺嘧啶核苷類似物。它也能夠在細胞增殖時期代替胸腺嘧啶(T)滲入正在復制的DNA分子,通過基于EdU與Apollo熒光染料的特異性反應檢測DNA復制活性,通過檢測EdU標記便能準確地反映細胞的增殖情況。


【實驗流程】

CFSE:加入CFSE-孵育-洗滌-培養-上機

BrdU:加入BrdU-孵育-洗滌-培養-上機

案例展示

流式增殖_副本.png

送檢與交付標準

樣品類型樣品需求運輸條件
組織離體后組織制成單細胞懸液,加入PBS培養基內常溫運輸
活細胞樣本量:1*106個細胞/TEST,加入PBS培養基內常溫運輸
血液將血液采集在EDTA肝素鈉的抗凝采血管內常溫運輸



流式交付標準.jpg