細胞周期檢測
體外培養(yǎng)細胞 生長、分裂繁殖的能力，可用分裂指數(shù)來表示。它與生長曲線有一定的聯(lián)系，如隨著分裂指數(shù)的不斷提高，細胞也就進入了指數(shù)生長期。分裂指數(shù)指細胞 群體中分裂細胞 所占的百分比，它是測定細胞 周期的一個重要指標，也是不同實驗研究選擇細胞的重要依據(jù)。
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實驗介紹
【技術(shù)原理】
流式利用不同熒光物質(zhì)標記的單克隆抗體，與待測成分作用，然后上流式細胞儀檢測待測細胞。待測細胞隨流動室內(nèi)的流動鞘液排列成單列，一個個迅速通過激光聚焦區(qū)，激光在對每個細胞進行照射時可同時得到前向角散射和側(cè)向角散射2種散射光以及激發(fā)熒光標記物發(fā)出的信號，利用這些信號，可計算出相對含量，從而得到細胞群的相對比值。
細胞周期分為間期與分裂期兩個階段。間期又分為三期：即DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）與DNA合成后期（G2期）。某些細胞在分裂結(jié)束后暫時離開細胞周期，停止細胞分裂，執(zhí)行一定生物學(xué)功能（G0期）。由于細胞周期各時相的DNA含量不同，通常正常細胞的G1/ G0期具有二倍體細胞的DNA含量（2N），而G2/ M期具有四倍體細胞的DNA含量（4N），而S期的DNA含量介于二倍體和四倍體之間。PI可以與DNA結(jié)合，其熒光強度直接反映了細胞內(nèi)DNA含量。因此，通過流式細胞儀PI染色法對細胞內(nèi)DNA含量進行檢測時，可以將細胞周期各時相區(qū)分為G1/G0期，S期和G2/M期。
【實驗方法】
Step1：細胞培養(yǎng)
Step2：轉(zhuǎn)染或藥物處理
Step3：細胞收集
Step4：加周期試劑
Step5：上機檢測
案例展示
在施加藥物后，細胞周期明顯阻滯。
技術(shù)總結(jié)
1、考慮到進行流式時需要用到對照組細胞設(shè)置空白組（用于調(diào)節(jié)電壓）和單染組細胞（用于調(diào)節(jié)補償），因此要求該組細胞量較其他組多；
2、如發(fā)現(xiàn)細胞密度偏低，細胞量較少，則適當增加離心時間。收集細胞時，應(yīng)該連同上清一起收集，同時胰酶消化時間不宜過長，否則容易引起假陽性；
3、檢測細胞經(jīng)過轉(zhuǎn)染等處理后可能會帶有自發(fā)熒光，應(yīng)注意選擇凋亡試劑盒的顏色通道 如：帶綠色熒光時，應(yīng)選擇7AAD試劑盒；
4、細胞鋪板應(yīng)選擇細胞狀態(tài)良好的時候進行，且避免因反復(fù)吹打形成機械損傷，而出現(xiàn)細胞碎片過多。
送檢與交付標準
| 樣品類型 | 樣品需求 | 運輸條件 |
|---|---|---|
| 組織 | 離體后組織制成單細胞懸液，加入PBS培養(yǎng)基內(nèi) | 常溫運輸 |
| 活細胞 | 樣本量：1*106個細胞/TEST，加入PBS培養(yǎng)基內(nèi) | 常溫運輸 |
| 血液 | 將血液采集在EDTA肝素鈉的抗凝采血管內(nèi) | 常溫運輸 |
電話：400-691-6686
在線時間：8:00-24:00
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