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細胞內活性氧檢測

熒光探針DCFH-DA進行活性氧檢測。DCFH-DA本身沒有熒光,可以自由穿過細胞膜,進入細胞內后,可以被細胞內的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細胞膜,從而使探針很容易被裝載到細胞內。細胞內的活性氧可以氧化無熒光的DCFH生成有熒光的DCF。檢測DCF的熒光就可以知道細胞內活性氧的水平。

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實驗介紹

【技術原理】

熒光探針DCFH-DA進行活性氧檢測。DCFH-DA本身沒有熒光,可以自由穿過細胞膜,進入細胞內后,可以被細胞內的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細胞膜,從而使探針很容易被裝載到細胞內。細胞內的活性氧可以氧化無熒光的DCFH生成有熒光的DCF。檢測DCF的熒光就可以知道細胞內活性氧的水平。細胞內活性氧的升高是細胞凋亡的標志之一。

 

【實驗流程】

Step1:制成單細胞懸液(組織樣本)

Step2:溶血(細胞樣本無需進行此步驟)

Step3:離心去上清

Step4:調整細胞密度

Step5:加入相應的熒光探針

Step6:孵育

Step7:洗滌后離心去上清

Step8:上機檢測


細胞活性氧檢測實驗流程.png

注意事項

1、為保證所得結果的可靠性,每次實驗前應用標準熒光微球檢測儀器的變異系數;

2、每次應做陰性對照、陽性對照、質控對照、以確保將各種試劑及操作過程對結果的影響降至最低;

3、細胞應保持良好的活性狀態,否則對結果影響較大。

送檢與交付標準

樣品類型樣品需求運輸條件
組織離體后組織制成單細胞懸液,加入PBS培養基內常溫運輸
活細胞樣本量:1*106個細胞/TEST,加入PBS培養基內常溫運輸
血液將血液采集在EDTA肝素鈉的抗凝采血管內常溫運輸




流式交付標準.jpg