細(xì)胞誘導(dǎo)/分化
細(xì)胞分化的本質(zhì)是基因組在時(shí)間和空間上的選擇性表達(dá),通過(guò)不同基因表達(dá)的開(kāi)啟或關(guān)閉,最終產(chǎn)生標(biāo)志性蛋白質(zhì)。細(xì)胞誘導(dǎo)是指將一群不同類型或者形態(tài)結(jié)構(gòu)、功能特征存在差異的細(xì)胞通過(guò)生物學(xué)、物理學(xué)等手段,將之轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂邢嗨?相同形態(tài)結(jié)構(gòu)、功能特征的細(xì)胞群體的過(guò)程。
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實(shí)驗(yàn)介紹
【應(yīng)用簡(jiǎn)介】
一般細(xì)胞系,尤其是腫瘤細(xì)胞系具有異質(zhì)性,導(dǎo)致通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)獲得的數(shù)據(jù)往往不能真實(shí)反映要研究的細(xì)胞類群的生理特征和生物學(xué)功能。為了使研究的對(duì)象盡量保持一致性,通過(guò)細(xì)胞誘導(dǎo)或者細(xì)胞分化的方式能盡可能地將細(xì)胞類群調(diào)節(jié)到相對(duì)一致的狀態(tài),從而使實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度更高。
【原理介紹】
細(xì)胞分化是指同一來(lái)源的細(xì)胞逐漸產(chǎn)生出形態(tài)結(jié)構(gòu)、功能特征各不相同的細(xì)胞類群的過(guò)程,其結(jié)果是在空間上細(xì)胞產(chǎn)生差異,在時(shí)間上同一細(xì)胞與其從前的狀態(tài)有所不同。細(xì)胞分化的本質(zhì)是基因組在時(shí)間和空間上的選擇性表達(dá),通過(guò)不同基因表達(dá)的開(kāi)啟或關(guān)閉,最終產(chǎn)生標(biāo)志性蛋白質(zhì)。細(xì)胞誘導(dǎo)是指將一群不同類型或者形態(tài)結(jié)構(gòu)、功能特征存在差異的細(xì)胞通過(guò)生物學(xué)、物理學(xué)等手段,將之轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂邢嗨?相同形態(tài)結(jié)構(gòu)、功能特征的細(xì)胞群體的過(guò)程。
【實(shí)驗(yàn)方法】
根據(jù)細(xì)胞類型的不同,誘導(dǎo)/分化的方式和方法各異。
案例展示
骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化
技術(shù)總結(jié)
根據(jù)細(xì)胞類型的不同,誘導(dǎo)/分化的方式和方法各異。
送檢與交付標(biāo)準(zhǔn)
樣品類型 | 樣品需求 | 保存條件 | 運(yùn)輸條件 | 備注 |
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凍存細(xì)胞 | 1.取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,消化離心收集細(xì)胞,加入凍存液吹打混勻,裝入凍存管,標(biāo)明細(xì)胞名稱/細(xì)胞代數(shù),凍存細(xì)胞數(shù)量在1-5*106個(gè)/ml。 2.項(xiàng)目啟動(dòng)后細(xì)胞復(fù)蘇,復(fù)蘇后3天反饋細(xì)胞狀態(tài),3-5天反饋細(xì)胞污染情況,5-7天反饋支原體污染情況。 3. 細(xì)胞詳細(xì)信息(名稱、培養(yǎng)基和其他培養(yǎng)條件等,如經(jīng)過(guò)特別處理需告知并提供必要的信息) | 液氮 | 干冰 | 所有樣本均須有唯一標(biāo)記,且標(biāo)記清晰可識(shí) |
復(fù)蘇后細(xì)胞 | 1.使用T25培養(yǎng)瓶運(yùn)輸。細(xì)胞匯合度達(dá)到60%以上,裝滿培養(yǎng)液,只留紐扣大小的氣泡,瓶口用封口膜封好,標(biāo)明細(xì)胞名稱/細(xì)胞代數(shù)/接種時(shí)間/培養(yǎng)基類型,瓶子固定運(yùn)輸。 2.收到細(xì)胞后3天反饋細(xì)胞狀態(tài),3-5天反饋細(xì)胞污染情況,5-7天反饋支原體污染情況。 3. 細(xì)胞詳細(xì)信息(名稱、培養(yǎng)基和其他培養(yǎng)條件等,如經(jīng)過(guò)特別處理需告知并提供必要的信息) | 常溫 | 常溫 | |
質(zhì)粒 | 1.純度高,無(wú)內(nèi)毒素,無(wú)蛋白質(zhì),基因組DNA/RNA污染,質(zhì)粒A260:A280的比值在1.8-2.0之間 2.濃度不低于0.5μg/μl,總量大于100μg,無(wú)內(nèi)毒素處理 3. 載體詳細(xì)信息,包括名稱、大小、抗性、熒光標(biāo)記 | -20℃ | 冰袋 | |
病毒 | 1.慢病毒:滴度不低于1*108TU/ml,體積約200μl,標(biāo)明制備時(shí)間,且沒(méi)有反復(fù)凍融 2.腺病毒:滴度不低于1*109PFU/ml,體積約200μl,標(biāo)明制備時(shí)間,且沒(méi)有反復(fù)凍融 3.明確是否表達(dá)熒光標(biāo)簽蛋白及其種類,最好需要提供病毒載體圖譜; | -80℃ | 干冰 |