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基因調取

原核生物的基因是連續不間隔的,直接用限制酶從DNA切取就可得到目的基因,再PCR擴增后就能得到大量目的基因。 真核細胞核基因組DNA編碼的基因,以及感染真核細胞的DNA病毒和反轉錄病毒基因組編碼基因,統稱真核基因。真核基因調取是指通以動物組織或細胞為模板,提取獲得cDNA或gDNA,從中擴增基因或啟動子等功能元件。也可將基因片段或者各功能元件片段亞克隆至各載體。

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【技術原理】

原核生物的基因是連續不間隔的,直接用限制酶從DNA切取就可得到目的基因,再PCR擴增后就能得到大量目的基因。

真核細胞核基因組DNA編碼的基因,以及感染真核細胞的DNA病毒和反轉錄病毒基因組編碼基因,統稱真核基因。真核基因調取是指通以動物組織或細胞為模板,提取獲得cDNA或gDNA,從中擴增基因或啟動子等功能元件。也可將基因片段或者各功能元件片段亞克隆至各載體。


【原核流程】

1596101691303378.png


【真核流程】

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案例展示

                                                           基因調取_副本.jpg


臨床組織樣本的目的基因調取

送檢與交付標準

樣品類型樣品需求保存條件運輸條件備注
動物組織單個樣品>0.1g,2mlEP管或凍存管裝,不要過量;樣本應盡量新鮮,如不能立即提取蛋白或核酸,應液氮速凍后凍存于-80℃或更低,凍存樣本避免反復凍融以致降解-80℃干冰所有樣本均須有唯一標記,且標記清晰可識
種子樣本去殼新鮮或保存于液氮中的的種子樣本,單個樣品>0.2g。-80℃干冰
貼壁/懸浮細胞

1. 總RNA或蛋白:106cell/指標、漿/核RNA或蛋白:107cell/指標、線粒體RNA或蛋白:2*107     cell/指標,樣本盡量新鮮,細胞收取后直接加Trizol(QPCR檢測)或直接凍存于-80℃       

2. 若細胞處理(加藥、轉染、感染)后狀態差應酌情加大收樣量

-80℃干冰
全血/血清樣品用抗凝管保存的外周血 5~10ml,骨髓 1~3ml; -80℃保存不超半周的白細胞勻漿>400μl,每 400μl 加入 400μl Trizol。-80℃干冰
石蠟包埋樣品由標準的石蠟包埋盒包埋的石蠟塊,有效厚度大于 0.1cm; 新鮮的 FFPE 組織切片,每片厚度不超過 10μm,2~8 張,表面積不超過 250mm2。-20℃冰袋
抗體

1. 按樣本種屬提供滿足相應實驗要求的抗體;

2. 按抗體說明書要求寄送,盡量避免分裝;如分裝,確保量足夠進行實驗,并提供抗體說明書。

3.保存抗體的抗體管上應有能夠識別此抗體的標記,抗體的量應大于實驗所需的量。

-20℃冰袋
引物干粉,≥1OD,如進行預實驗,每個基因至少提供兩對引物, 附帶公司引物合成單。-20℃冰袋或常溫




細胞交付標準.jpg