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什么是 RNP 法KO細胞株服務？
RNP（核糖核蛋白復合物）法 KO 穩(wěn)株服務，是將預先組裝好的 Cas9 蛋白與向?qū)?RNA（gRNA）形成的 RNP 復合物，通過電穿孔技術精準導入目標細胞，實現(xiàn)特定基因穩(wěn)定敲除（KO）的專業(yè)服務。我們依托優(yōu)化的 RNP 組裝體系與高效電轉(zhuǎn)平臺，針對客戶需求設計個性化方案，構建遺傳背景清晰、表型穩(wěn)定的 KO 細胞株，為科研與藥物研發(fā)提供核心實驗模型。
RNP 復合物組裝：將高活性 Cas9 蛋白與靶向目標基因的特異性 gRNA 在體外進行組裝，形成具有高度靶向性的編輯復合物。
電穿孔導入：利用電轉(zhuǎn)儀產(chǎn)生的瞬時電場在細胞膜上形成微孔，使 RNP 復合物高效進入細胞，相比傳統(tǒng)病毒轉(zhuǎn)染或質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，大幅提升編輯效率與細胞存活率。
精準基因敲除：進入細胞的 RNP 復合物快速識別靶基因序列并切割，觸發(fā)細胞內(nèi)源性 DNA 修復機制（非同源末端連接 NHEJ），最終實現(xiàn)目標基因的穩(wěn)定敲除。
低脫靶保障：RNP 復合物在細胞內(nèi)半衰期短（24-48 小時），可快速降解，顯著降低長期表達導致的脫靶效應，同時避免外源基因整合帶來的基因組干擾
超高精準性：RNP 復合物直接作用于靶序列，無外源 DNA 整合，結合短半衰期特性。
高效轉(zhuǎn)染：電轉(zhuǎn)技術適配多種難轉(zhuǎn)染細胞（如免疫細胞），高于脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染。
快速交付：優(yōu)化的 RNP 組裝-電轉(zhuǎn)-篩選流程，無需等待蛋白表達，穩(wěn)株構建周期縮短至8-12周。
細胞友好：低電壓脈沖設計減少細胞損傷，適合珍貴細胞樣本。
廣泛適用：覆蓋腫瘤細胞、免疫細胞（如 T 細胞、NK 細胞）等 200 + 細胞類型。
標準化服務流程
1. 需求定制：深入溝通客戶研究目標（如基因功能、藥物篩選）、靶基因信息及細胞特性（如細胞系 / 難轉(zhuǎn)染程度），提供全面的可行性評估報告與個性化方案。
2. RNP 設計與組裝：根據(jù)靶基因序列設計2條高特異性 gRNA。
3. 細胞電轉(zhuǎn)與培養(yǎng)：將 RNP 復合物通過電轉(zhuǎn)入細胞，置于專用培養(yǎng)體系中恢復培養(yǎng)，實時監(jiān)測細胞狀態(tài)。
4. 單克隆篩選與鑒定：采用流式細胞分選獲得單克隆細胞，通過 PCR 擴增靶基因片段、Sanger 測序驗證敲除效率，篩選純合子克隆。
5. 交付與售后：交付合格 KO 細胞株（含凍存管2支）、完整實驗報告（含 gRNA 序列、測序結果），提供 1 個月技術支持，解答后續(xù)培養(yǎng)與實驗疑問。
1. 基因型驗證：采用Sanger 測序確認靶基因敲除類型（移碼突變 / 片段缺失）
2. 細胞質(zhì)控：
(1) 支原體檢測：PCR 法檢測支原體，結果陰性方可交付。
(2) 追溯體系：每批次實驗保留檢測原始數(shù)據(jù)，支持結果溯源與重復驗證。
(3) 表型驗證：可根據(jù)客戶需求，加做細胞增殖（CCK-8）、凋亡（流式 Annexin V）、功能標志物表達（Western Blot / 流式）等表型變化檢測服務。
1. 基因功能研究：構建特定基因 KO 穩(wěn)株，通過對比野生型與 KO 細胞的轉(zhuǎn)錄組、代謝組差異，解析基因在細胞周期、信號通路、疾病發(fā)生中的調(diào)控機制。
2. 腫瘤研究與藥物篩選：針對腫瘤驅(qū)動基因（如 EGFR、KRAS）構建 KO 穩(wěn)株，用于驗證藥物靶點有效性，或篩選靶向該基因的小分子藥物、抗體藥物。
3. 細胞治療研發(fā)：在 CAR-T 細胞、iPSC 等細胞治療領域，通過 RNP 電轉(zhuǎn)敲除 PD-1、TCR 等基因，增強細胞治療效果，降低免疫排斥風險。
4. 傳染病研究：敲除病毒受體基因（如 ACE2、CD4）構建抗病毒細胞模型，用于病毒入侵機制研究及抗病毒藥物篩選。
5. 遺傳病模型構建：模擬人類遺傳病相關基因突變（如囊性纖維化 CFTR 基因、鐮狀細胞貧血 HBB 基因），建立 KO 細胞模型，助力發(fā)病機制研究與基因治療方案開發(fā)。
某三甲醫(yī)院腫瘤研究所需構建結直腸癌細胞KO細胞株（靶基因為NPSR1），傳統(tǒng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率不足30%。我們采用RNP電轉(zhuǎn)法，優(yōu)化參數(shù)后轉(zhuǎn)染效率達80%，8周成功交付KO單克隆純合子，經(jīng)團隊后期Western blot檢測，NPSR1基因敲除率100%。
某高校附屬醫(yī)學院肝病研究所需敲除原代肝癌細胞中的UPG基因以進行藥篩。我們通過設計2條gRNA與Cas9蛋白組裝，并使用RNP電轉(zhuǎn)法在原代肝癌細胞中成功實現(xiàn)了UPG基因的雜合敲除，單克隆細胞存活率100%。
某高校發(fā)育生物學團隊需在小鼠單核巨噬細胞白血病細胞系（Raw264.7）中敲除EGR1基因，由于細胞半懸浮半貼壁生長，傳統(tǒng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染及慢病毒法敲除效率低、周期長，我們采用低損傷RNP電轉(zhuǎn)方案，設計3條sgRNA，最終獲得 EGR1 KO細胞池（多克隆），團隊繼續(xù)進行單克隆篩選。
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